人CYCLIN B1抗體酶聯(lián)免疫操作步驟

1.標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

600pg/ml

5號標(biāo)準品

150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

300pg/ml

4號標(biāo)準品

150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

150pg/ml

3號標(biāo)準品

150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

75pg/ml

2號標(biāo)準品

150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

37.5pg/ml

1號標(biāo)準品

150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。